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在试样中添加果糖基氨基酸氧化酶(FAOD),将上述试样中存在的与测定对象糖化胺不同...的β链N末端缬氨酸、或N末端序列变为“Val-Leu-Ser-Pro-Ala-Asp…”的α链N末端缬氨酸 ...
糖化胺的测定方法技术领域
本发明涉及利用氧化还原反应来测定糖化蛋白质等糖化胺的方法。
背景技术
血球中的糖化血红蛋白(特别是“HbAlc”),由于其浓度反映生物体血糖值的过去状况,因此被作为糖尿病诊断和治疗等中的重要指标。该HbAlc的测定通常通过免疫学方法、HPLC法等进行。
但是,在全血或血球中,除了作为测定对象的糖化血红蛋白(糖化Hb)以外,还存在作为非测定对象物的糖化胺(例如糖化清蛋白、糖化肽和糖化氨基酸等)等各种糖化物。因此,也测定了这种测定对象物以外的糖化物(非测定对象物),结果得到了高于真值的测定值,存在着显示假阳性的问题。
为了解决这种问题,在上述免疫学方法中,提出了例如以下的方法。即,在测定对象物与抗测定对象物的抗体的主反应之前,形成非测定对象物与抗非测定对象物抗体的复合物,使非测定对象物的结构变为不对糖化Hb的免疫反应产生影响的结构的方法(例如参照专利文献1)、通过B/F分离,将非测定对象物从试样中分离除去的方法等。另外在HPLC法中,提出了例如对于1个试样准备2根HPLC柱,用第1根柱将非测定对象物从试样中除去,用第2根柱进行测定对象物的分离分析的方法。
然而,如果利用上述免疫学方法,则成本高,而且由于进一步需要与主反应不同的抗体抗原反应,因此存在反应体系的环境设定变得复杂、测定需要很长时间的问题。另外,对于B/F分离,显然操作变得烦杂。而且,由于抗体仅对具有特异性的物质(抗原)起效,因此当试样中所含有的非测定对象物的种类不明确或其种类多样时等,难以充分地排除非测定对象物的影响。另外,即便在HPLC法中,由于使用2根柱,因此也难以回避高成本,而且由于非测定对象物的分离需要时间,因此为了提高测定精度时,在测定时间的缩短上是有限的。
另一方面,近年来在以糖化Hb为代表的各种糖化蛋白质的测定中,利用了氧化还原反应的酶法被广泛使用,可谋求实用化。具体可如下测定。
首先,制备使血球溶血的试样,在该溶血试样中添加蛋白酶,生成糖化Hb分解物。进而在该分解物中添加果...
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