茚三酮显色法测定氨基酸含量 | 水果好營養
相关专题一、目的学习茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法二、原理茚三酮溶液与氨基酸共热,生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应,生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅 ...
相关专题一、目的
学习茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法
二、原理
茚三酮溶液与氨基酸共热,生成氨。氨与茚三酮和还原性茚三酮反应,生成紫色化合物。
该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比,可通过测定570nm 处的光密度,测定氨基酸的含量。
三、 试剂与材料 (1)标准氨基酸溶液:配制成0.3mmol/L 溶液。 (2)pH5.4,2mol/L 醋酸缓冲液:量取86mL 2mol/L 醋酸钠溶液,加入14mL 2mol/L乙酸混合而成。用pH 检查校正。 (3)茚三酮显色液:称取85mg 茚三酮和15mg 还原茚三酮,用10mL 乙二醇甲醚溶解。 茚三酮若变为微红色,则需按下法重结晶:称取5g 茚三酮溶于15~25mL 热蒸馏水中,加入0.25g 活性炭,轻轻搅拌。加热30min 后趁热过滤,滤液放入冰箱过夜。次日析出黄白色结晶,抽滤,用1mL 冷水洗涤结晶,置干燥器干燥后,装入棕色玻璃瓶保存。 还原型茚三酮按下法制备:称取5g 茚三酮,用125mL 沸蒸馏水溶解,得黄色溶液。 将5g 维生素C 用250mL 温蒸馏水溶解,一边搅拌一边将维生素C 溶液滴加到茚三酮溶液中,不断出现沉淀。滴定后继续搅拌15min,然后在冰箱内冷却到4℃,过滤、沉淀用冷水洗涤3 次,置五氧化二磷真空干燥器中干燥保存,备用。乙二醇甲醚若放置太久,需用下法除去过氧化物:在500mL 乙二醇甲醚中加入5g 硫酸亚铁,振荡1~2h,过滤除去硫酸亚铁,再经蒸馏,收集沸点为121~125℃的馏分,为无色透明的乙二醇甲醚。 (4)60%乙醇。 (5)样品液:每毫升含0.5~50μg 氨基酸。 (6)分光光度计 。 (7)水浴锅。 四、操作步骤 1.标准曲线的制作 分别取0.3mmol/L 的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL ...
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