蛋白質表達與純化的使用秘訣:蛋白標籤(Protein ... | 水果好營養
2020年7月10日—His-Tag由6個Histidine殘基組成,分子量小,僅約有0.84KD,不影響目標蛋白的功能。其側鏈可與鎳金屬吸附,常用於金屬螯合層析,在變性條件下,用高 ...
重組蛋白在蛋白質體學扮演舉足輕重的角色,為了使表達、檢測、追蹤和純化目標蛋白更為方便,蛋白標籤 (Protein Tag)的出現成了最強大的幫手。
標籤 (Tag)為利用DNA體外重組技術,可與目標蛋白一起融合表達的一種多肽或蛋白,其具有以下的特徵:
1. 對目標蛋白的三級結構和生物活性影響小。
2. 提供快速親和吸附純化,且在過程中可簡便、準確的分析重組蛋白。
3. 可用於大量生產重組蛋白。
目前常見的標籤可分為螢光標籤與小分子多肽,如下圖所列。
此外,還有大分子蛋白GST、MBP等。螢光標籤融合蛋白的好處是可在不破壞組織細胞,直接通過螢光顯微鏡在活細胞中實際檢測目標基因的表達。
提供快速、簡便、靈敏,重複性高的檢測效果,適用於高通量的藥物篩選,亦可廣泛用於基因表達調控、目標蛋白在細胞中功能定位、遷移變化等研究。
Myc-Tag為11個胺基酸構成的多肽,常用於Western-blot (WB)、Immunoprecipitation (IP) 和 Flow cytometry (FC)實驗。透過Anti-Myc抗體可檢測重組蛋白質在目標細胞中的表達量。
Flag-Tag為8個親水性胺基酸組成的多肽,通常不會與目標蛋白相互作用而影響蛋白的功能與性質。在非變形條件下可直接進行親和層析,純化有活性的融合蛋白,具高效率。
同樣可藉由Anti-F...
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