蛋白纯化标签His | 水果好營養
2018年4月24日—His-tag可与多种金属离子发生特殊的相互作用,包括Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+,Fe3+等,其原理是利用蛋白质表面的特性,使之被吸附在凝胶柱上,从而达到分离 ...
His tag是基于蛋白质表面的组氨酸残基侧链,在中性和弱碱性条件下可以和固定化的金属离子相互作用(如Ni离子,Zn离子,Co离子等),从而达到纯化蛋白的作用,它是目前常见的蛋白纯化[1]标签之一。
1、什么是His-tag
是重组蛋白表达最常用的标签,无论表达的蛋白是可溶的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和层析(IMAC)纯化。
金属螯合亲合层析,又称固定化金属离子亲合层析(Immobilizedmetal ion affinity chromatography, IMAC),是近30年发展起来的一种新型分离技术。最早由Paroth等人提出。该方法利用蛋白质表面的一些氨基酸,如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等能和金属离子发生特殊的相互作用的原理,从而对蛋白质加以分离。这些作用包括配价键结合、静电吸附、共价键结合,其中以配价键结合为主,而且这其中又以6组氨酸标签(His-Tag)应用最为广泛。
以His-Tag纯化标签结合金属螯合亲合层析,为重组蛋白质的分离纯化提供了一个有力的工具。由于金属螯合亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点,上样条件可选择范围广,在高盐、一定浓度的变性剂以及去垢剂的条件下,带6His纯化标签的蛋白质都可以和亲合填料特异性结合,逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一。
2、His-tag是蛋白纯化的首选标签
(1)His-Tag非常小,在融合蛋白结晶后对蛋白结构没有影响;
(2)N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容,有利于蛋白表达;
(3)采用IMAC(固定化金属离子亲合层析)纯化His-Tag融合蛋白操作更加简便;
(4)His-Tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响,不会形成二聚体;
(5)His-Tag的免疫原性相对较低,可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体;
(6)与其它...
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