[實驗] Protein content assay - Bradford | 水果好營養
![[實驗] Protein content assay - Bradford](https://i.imgur.com/Dp6k9gg.jpg)
2017年5月31日—即可得出標準曲線與回歸直線,並將兩館未知樣品之吸光質帶入方程式中,即...定量蛋白質所用的試劑CBG與蛋白質染色所用的染劑CBR其實差不多,在分子 ...
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吸光原理為分子電子躍遷,因蛋白質分子中的羰基與苯環電子躍遷所需的能量剛好落於紫外光的波長,因此蛋白質本身的結構就帶有可吸收紫外光的特性。也可以利用化學染劑結合於蛋白質分子上,形成染劑-蛋白質複合物,且這些複合物本身也具有吸光性。不同的染劑,複合物就會有不同的吸光波長,因此可以使用多種的光源與增加其技術的敏感度。
光吸收的基本定量原理為Beer–Lambert law,吸收介質的濃度愈大,介質的厚度愈大,則光強度的減弱愈顯著。其關係式為吸光度=吸收係數x吸收介質厚度x濃度,因此當吸收係數與吸收介質厚度皆為定值時,就可以利用吸光度與吸收介質濃度成正比的關係,去定量出未知濃度的樣品。
二、實驗步驟熟悉分光光度計操作方法,並預先熱機15分鐘,再進行儀器操作。取4 mL的Coomassie blue solution到玻璃比色管,並依序將0, 250, 500, 750, 1500μg/mL的蛋白質溶液加入80μL於比色管中。混和均勻後,靜置5~10分鐘,測定595nm波長吸光值。即可得出標準曲線與回歸直線,並將兩館未知樣品之吸光質帶入方程式中,即可求出未知的濃度。
三、實驗結果 #1 - #7 樣品顏色將濃度0, 250, 500, 750, 1500μg/mL的標準樣品拿去測量並劃出標準曲線,得到y = 0.0007x + 0.0644, R² = 0.9723。並將未知濃度的樣品(#6 & #7)拿去測量,吸收度分別為0.58與0.31,並將之帶入標準曲線中,得到理論濃度為732與344。其中#7實際與理論相差最大,差距為294,已經超出標準樣本的平均絕對離差79.2,因此,我認為#7有人為上的誤差。
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