除去甲硫氨酰蛋白的n | 水果好營養
![除去甲硫氨酰蛋白的n](https://i.imgur.com/Dp6k9gg.jpg)
可以通过将甲硫氨酰蛋白与氨肽酶反应有效地除去该蛋白的N-末端蛋氨酸。...酸的类型外,如在天然人白细胞介素2中还发现有氨酸末端为蛋氨酸的分子类型(Met-rIL-2)。
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本发明有关除去甲硫氨酰蛋白N-末端蛋氨酸的方法。
在细胞内合成一种蛋白时,总是用蛋氨酸占据氨基末端(在原核衍生物中,是甲酰甲硫氨酸),它们是对应mRNA的起始码,即AUG。然而产生的成熟蛋白分子中,这种蛋氨酸通常就不再存在,因为它已通过紧接着的加工过程被除掉了。
另一方面,近来基团重组技术的迅速发展使人们可能用微生物或动物细胞如:大肠杆菌来生产有用的蛋白。在某些情况下,产生的蛋白保留了上述的蛋氨酸。例如:在大肠杆菌表达的氨基酸顺序如图1所示非糖基化的人白细胞介素2(rIL-2)中,除了有起始氨基酸为丙氨酸的类型外,如在天然人白细胞介素2中还发现有氨酸末端为蛋氨酸的分子类型(Met-rIL-2)。进一步又发现在α干扰素中加蛋氨酸的比率达50%(见“干扰素研究杂志”1981年第1期381页)而在人类生长激素中达大约100%(见“自然1981年,293期,408页)。
可以想像一个氨酸末端为蛋氨酸的蛋白分子与另一个氨酸末端不是蛋氨酸的分子间,既使是相同蛋白,其三维结构,生物活性和稳定性也可能是不同的。氨基端蛋氨酸的加入被认为可能导致增强蛋白的抗原性。因而,在工业应用方面,建立除掉这种氨基端蛋氨酸的方法是很有意义的。
为解决这个问题,提出了用溴化氰(BrcN)切割法除去蛋氨酸的方法(见“科学”1977年198期1056页)。但是由于该方法不仅使所需成熟蛋白分子中的其它蛋氨酸残基丢失,而且还使该蛋白处于剧烈的化学反应中,所以结果是不能令人满意的。
PCT国际专利公开Nowo84/02351揭示了一种生产成熟蛋白的方法,该方法是用氨肽酶分解具有由2个或多个氨基酸组成的前顺序或密码顺序的融合蛋白:然而这种方法不能只切割氨基蛋氨酸,所以也不能达到上述目的。
本发明者研究了如何通过单独切割遗传工程技术合成肽的氨基酸顺序的肽。发现用氨肽酶作用于肽可使氨基端蛋氨酸从一些肽中单独特异地切割下来。进一步研究,从而完成了本发明。
本发明涉及式(Ⅰ)表示的甲硫氨酰蛋白中除去N端蛋氨酸的方法:
H-蛋-X-脯...
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