凱氏定氮法:原理,試劑,儀器,操作,計算 | 水果好營養
凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽,然後在鹼性條件下將 ...
原理 蛋白質是含氮的有機化合物[1]。蛋白質與濃硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然後鹼化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標準溶液[2]滴定[3],根據酸的消耗量乘以換算係數[4],並換算成蛋白質含量。含氮量*6.25=蛋白含量 .有機物中的氨在強熱和CuSO4,濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4反應式為: 凱氏定氮法2NH3+H2SO4=(NH4)2SO4 (其中CuSO4做催化劑)
2.在凱氏定氮器中與鹼[5]作用,通過蒸餾[6]釋放出NH3 ,收集於H3BO3 溶液中反應式為:
(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
3. 用已知濃度的H2SO4(或HCI)標準溶液滴定,根據HCI消耗的量計算出氮的含量,然後乘以相應的換算因子[7],即得蛋白質的含量反應式為:
(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
試劑 所有試劑均用不含氨的蒸餾水[8]配製。2.2 硫酸鉀。
2.3 硫酸。
2.4 2%硼酸溶液。
2.5 混合指示液:1份0.1%甲基紅[9]乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠[10]乙醇溶液臨用時混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍[11]乙醇溶液臨用時混合。2.6 30%氫氧化鈉溶液。
2.7 0.025mol/L硫酸標準溶液[12]或0.05mol/L鹽酸標準溶液。 儀器 ...NF354 凱氏氮分解及蒸餾裝置使用說明 | 水果好營養
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