雙縮脲反應 | 水果好營養
在鹼性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)能與銅離子(Cu2+)作用,形成紫色絡合物(該物質的分子結構式見圖),該反應即雙縮脲反應。
雙縮脲反應是肽[1]和蛋白質[2]所特有的,而為胺基酸[3]所沒有的一種顏色反應。一般分子[4]中含有兩個氨基甲酪基(即肽鍵:-CO-NH-)的化合物[5]與鹼性
銅溶液作用,就會形成紫色或藍紫色絡合物。
註:除-CO-NH-有此反應外,(-CONH2-)、(-CH2-)、(-NH2-)、(-CS-CS-NH2)等基團亦有此反應。
雙縮脲反應的鑒定由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應,且顏色深淺與蛋白質的含量的關係在一定範圍內符合比爾定律,而與蛋白質的胺基酸組成及分子量無關,故可用雙縮脲法測定蛋白質的含量(藉助分光光度計[6]可減小誤差)。
雙縮脲反應主要涉及肽鍵,因此受蛋白質特異性影響較小。且使用試劑[7]價廉易得,操作簡便,可測定的範圍為1~10mg蛋白質,適於精度要求不太高的蛋白質含量的測定,能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上。雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大。干擾此測定的物質包括在性質上是胺基酸或肽的緩衝液[8],如TrIs緩衝液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沉澱。
配製雙縮脲試劑的注意事項雙縮脲試劑由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配製而成,配製比例為5:1,注意必須即配即用。
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