蛋白质含量的定量测定——双缩脲法(Biuret法) | 水果好營養
2020年9月8日—双缩脲试剂:取1.5g硫酸铜(CuSO4?5H2O)和6.0g的酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O)溶于500mL蒸馏水中,在搅拌下加入300mL10%NaOH溶液, ...
实验原理
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫好色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似,也能与Cu2+形成紫红色络合物,其最大光吸收在540nm处。其颜色深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸的组成无关,该法测定蛋白质的浓度范围适于1~10mg /mL。双缩脲法常用于蛋白质的快速测定。 紫红色铜双缩脲复合物分子结构为: 试剂和器材 一、试剂
双缩脲试剂:取1.5g硫酸铜(CuSO4?5H2O)和6.0g的酒石酸钾钠(NaKC4H4O6 · 4H2O)溶于500mL蒸馏水中,在搅拌下加入300mL 10%NaOH溶液,用水稀释至1000mL。此试剂可长期保存、备用。
二、标准和待测蛋白质溶液 标准蛋白溶液
10mg/mL结晶牛血清白蛋白溶液或相同浓度的酪蛋白溶液(用0.05mol/L氢氧化钠溶液配制)。作为标准用的蛋白质要预先用微量克氏定氮法测定蛋白质含量,根据其纯度称量,配制成标准溶液。 待测蛋白质溶液
人血清(稀释10倍)。测试其他蛋白质样品应稀释适当倍数,使其浓度在标准曲线测试范围内。
三、器材 试管1.5×15cm(×16),试管架,移液管1mL(×3);5mL(×1);恒温水浴;分光光度计。 操作方法
一、制作标准曲线
取12支试管分成两组,按下表平行操作:
蒸馏
0
1
2 ...
【高中生物】配置双缩脲试剂并检测牛奶中蛋白质的实验 | 水果好營養
什么是雙縮尿試劑??? | 水果好營養
双缩脲试剂 | 水果好營養
蛋白質含量測定:蛋白質測定方法之雙縮脲法(Biuret法) | 水果好營養
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雙縮脲試劑 | 水果好營養
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