使用Waters AccQ•Tag化學品進行胺基酸衍生化 | 水果好營養
AccQ•Tag方法是一種管柱前衍生化技術,適用於水解後胜肽與蛋白質的胺基酸分析。AccQ•Tag方法能發揮下列...衍生化過程添加的硼酸鹽總量是70µL,因此有兩種中和方法:.
要使所有胺基酸完全衍生化,反應過程需要莫耳量過量4–6倍的AccQ•Tag衍生化試劑。若試劑不足,某些相對靈敏的胺基酸就無法完全衍生化。每種胺基酸的衍生化比率因胺基酸的化學性質而異;例如,AccQ•Tag莫耳量過量不足時,丙胺酸的回收率可能會大受影響,而苯丙胺酸就比較不容易受影響。
要確定應添加至試劑瓶中的樣品量,我們需要知道每個試劑瓶中的試劑量。標準AccQ•Tag試劑瓶含3–4 mg試劑,大約是10–14 µmol試劑。由於試劑溶於1 mL乙腈中,且每100 µL衍生化反應要用到20 µL試劑,因此每個反應瓶各含210–280nmol衍生化試劑。
由於每個反應瓶各含210–280 nmol試劑,且每個樣品需有4–6倍莫耳量過量,因此每次反應的胺總量不應少於40–140 nmol。
計算範例: 對於蛋白質樣品,請使用樣品重量和胺基酸的平均重量估算所需的過量。
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